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在實驗室如何取得提取RNA(材料任選)

日期:2025-05-18 17:44
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摘要:

植物病毒的RNA提?。?
大多植物病毒RNA為單鏈RNA,并且其極性與mRNA極性相同,植物病毒RNA提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。 
  一、材料 
  提純TMV病毒液(10mg/ml)。 
  二、設備 
  冷凍臺式離心機,低溫真空干燥儀,電泳儀,電泳槽。 
  三、試劑 
  TE-飽和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE緩沖液,無RNA酶的雙菌水。 
  四、操作步驟 
  1、取一eppendorf管參入提純TMV(10mg/ml)400ml,再參入等體積酚/氯仿,蓋緊管蓋后用手充分振蕩1分鐘,4℃下12000g離心10分鐘。
  2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有機相交界面無蛋白為止。
  3、吸取水相于新eppendorf心管,參入等體積氯仿,用手倒置離心管數十秒,4℃下12000g離心10分鐘。
  4、取水相,參入1/10倍體積的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍體積的冰冷乙醇,混勻,-20℃30分鐘。 
  5、4℃下12000g離心15分鐘,小心棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉淀,4℃下12000g離心5分鐘。
  6、小心棄去上清液,沉淀真空干燥5分鐘或空氣干燥10分鐘,并溶于無RNA酶的雙菌水或TE緩沖液中。
  7、取10ml運行電泳分析,另10ml用于cDNA合成。 
  [注意] 1、整個操作應盡可能在低溫下運行。 
  2、由于病毒RNA鑲嵌于外殼蛋白里面,因此要充分剝去病毒外殼蛋白,一般需要多次運行酚/氯仿的抽提。

 

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